1 材料与方法 

1.1 试验时间、地点 

于2017年4月在山东省林业科学研究院组 培室进行。 

1.2 试验材料 

采用山东省林业科学研究院自主培育的中国柽柳茎段为试材。 

1.3 试验方法

将带回的小枝剪成长 1.5~2 cm 茎 段，先用肥皂水洗净表面灰尘和菌体，洗净后，流水冲 洗0.5~1 h。将清洗后的茎段置于超净工作台上，用75% 酒精浸泡30 s，期间缓慢晃动，用无菌水冲洗3遍，再用 2%次氯酸钠消毒液浸泡3~5 min，无菌水冲洗4~5次，倒 入0.1%含有吐温的升汞溶液中轻晃(3、5、8、10 min)，无 菌水冲洗5次，取出茎段，用无菌滤纸吸去表面水分， 剪去接触升汞的外植体断面，接种在初代培养基上。 10天后统计外植体的灭菌及生长情况。初代培养使用MS培养基，加蔗糖20 g/L， 琼脂 6.5 g/L，pH 5.8~6.0。培养条件为温度(25±2)℃， 光照度2000~3000 lx，光照时间14 h。经过15~20天的 培养，观察新梢生长情况。MS 为基本培养基，取初 代培养 30 天、苗高为 1.0~2.0 cm 的无菌苗，接种于添 加不同配比的 6-BA(0.5、1.0、1.5 mg/L)和 NAA(0.05、 0.1、0.2 mg/L)的培养基上。培养基均附加蔗糖30 g/L、 琼脂7.0 g/L，pH 5.8。试验每处理1瓶，每瓶接种6个 单芽，重复 3 次。置光下（培养温度(25±2)℃，光强 2000~3000 lx，光照时间16 h/d）培养30天后观察统计 苗芽增殖情况。生根率=(生根外植体数/接种外植体数)×100% … (3) 1.3.6 试验仪器 双人双面垂直净化工作台（上海九州网址 实业有限公司生产 ，外型尺寸 1460 mm ×700 mm × 1650 mm，工作区风速范围 0.1~0.6 m/s（可调））；上海九州网址YQX-100G全自动立式压力蒸汽灭菌锅（上海九州网址实业有限公司生产， 100 L）。

2 结果与分析

将经升汞处理不同时间的外植体接种到初代培养 基上，10天后统计外植体的灭菌及生长情况如表1所 示。处理1污染率较高，说明升汞3 min浸泡灭菌不够 彻底；当升汞浸泡时间延长至5 min，污染率显著降低 至5.6%，外植体长势较好。但随着升汞浸泡时间的再 延长，外植体污染率呈升高态势，部分外植体底部出现 褐化，加入活性炭能够抑制褐化现象。当升汞浸泡时 间达到 10 min 时，部分外植体出现整株干枝情况。综上，采取75%酒精浸泡30 s、2%次氯酸钠浸 泡 3~5 min 和升汞浸泡 5 min 的灭菌方案为最适宜的 灭菌方案。

3 讨论 

在柽柳的快繁体系建立过程中，通常采用种子、 茎段等作为外植体获得无菌苗，后通过2种途径（诱 导愈伤组织进而获得丛生芽和直接诱导丛生芽）进 行扩繁。本试验采用直接诱导丛生芽的方法进行扩繁，周期短，操作简单，能快速获得大量无菌苗。在诱 导丛生芽的过程中，对细胞分裂素 6-BA 和生长素 NAA 的配比是丛生芽生长健壮与否的关键，6-BA 有 促进细胞分裂、分化、抑制顶端优势、促进侧芽的作用； NAA主要是促进细胞的生长，特别是细胞的伸长。刘 振林在进行白花柽柳的丛生芽诱导过程中采用的生长 素为IBA，丛生芽的出芽率达98.68%。

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