羧肽酶酶制剂商品供应主要来源于猪胰腺,但 价格昂贵。因此,利用微生物获得大量的羧肽酶,具有 重要的现实意义。黑曲霉(Aspergillus niger)是国际上公 认的安全发酵微生物,且适合采用固态发酵的方式,而 黑曲霉生产羧肽酶发酵工艺条件鲜见报道。是在 前期筛选分离纯化获得的羧肽酶活力较高的黑曲霉(Aspergillus niger)H1-6的基础上,利用固态发酵技术,优化其 产酶发酵工艺参数,并考察发酵粗酶液在酱油酿造发酵中 的应用效果,为实现羧肽酶的规模化生产、降低成本来满 足商业化的需要,对推动我国相关产业发展具有重要意义。SW-CJ-ZFD型双人单面净化工作台:苏州净化设备有限 公司;DHP-9162型电热恒温培养箱:上海九州网址实业有限公司;722N型可见分光光度计:上海精密科学仪器有限公司。
当碳源为麸皮时,羧肽酶的固态发酵酶活 力最高(640±32)mU/g,其他依次为玉米芯粉、米糠和甘蔗 渣;当氮源为豆粕时,羧肽酶的酶活力最高(703±11)mU/g, 其他依次为花生粕、玉米粉和菜籽油饼;无机盐中的NaCl 对羧肽酶的固态发酵酶活力有正相关性,其他的K2PO3、 MgSO4、MnSO4 ·H2O、FeCl3 ·H2O和CaCl2则没有影响;黑曲 霉接种量为1.0%时,羧肽酶的固态发酵酶活力达到最高 (746±22)mU/g;初始pH值为6.5时,羧肽酶的固态发酵酶 活力最高(773±16)mU/g;水分含量为55%时,羧肽酶的固 态发酵酶活力最高(826±23)mU/g。根据Box-Behnken 试验设计原理(中心组合试验设计 原理),设计3因素5水平共20个试验点的响应面分析试验, 其中有14个析因点,6个零点重复,以羧肽酶酶活力(Y)为 响应值,以估计试验误差,分析黑曲霉H1-6固态发酵羧肽 酶活力的最佳条件。