探讨干扰和过表达 DCN 基因对猪卵泡颗粒细 胞的表型和功能的影响，以及其对TGF－β通路下游相 关基因和凋亡基因的表达调控，为解析猪卵泡发育和 排卵数量控制机理提供新的依据。超净工作台，购自上海九州网址医疗设备厂; 台式高 速离心机、酶标仪，均购自美国 Thermo 公司; 核酸蛋 白检测仪、水平电泳槽电泳仪、Vniversal Hood Ⅱ凝胶 成像系统，均购自美国 Bio－Ｒad 公司; 电热恒温培养 箱、超恒温水浴锅，均购自上海精宏实验设备有限公 司; 电热恒温鼓风干燥箱，购自宁波东南仪器有限公 司; 荧光定量 PCＲ 仪，购自上海罗氏制药有限公司; 流式细胞仪，购自美国 BD 公司。

    将采集的母猪卵巢放于 35 ～ 37 ℃含 5%青霉素、 链霉 素 混 合 液 ( 青 霉 素 10 000 IU /mL，链 霉 素 10 000 μg /mL) 的生理盐水中，1 h 内带回实验室。 再用含 5%青霉素、链霉素混合液的灭菌 PBS 将卵巢 中残留的血液和杂质冲洗干净，选取直径 1 ～ 5 mm 的 卵巢放入盛有 DMEM 培养基的 6 cm 培养皿中，用手 术刀片刺破并刮出卵泡液( 避开血管) ，使得卵泡液 充分流入到 DMEM 培养基中; 用 200 目不锈钢细胞 筛过滤后1 000 r /min离心 5 min，用含 10% FBS 的 DMEM 培养基重悬卵泡颗粒细胞并计数，与阴性对照组和空白对照组相比， 干扰质粒 pSIＲEN－DCN01 使细胞的增殖有所上升但 并不显著( P＞ 0. 05) ，表明下调 DCN 基因表达后，颗 粒细胞的增殖能力增强; 过表达质粒 pcDNA3. 1( +) － DCN 使细胞的增殖极显著下降( P＜0. 01) ，表明过表 达 DCN 基因后，颗粒细胞的增殖能力下降，将会影响 颗粒细胞的生长。