白血病是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病。 治疗白血病的方式主要是采用联合化疗，但其毒副 作用也很明显。依据中医学对白血病的认识，拟益气养阴方，由益气和养阴的中药组成，无清热解毒 类的中药，毒副作用更小。制备大鼠含药血清，联 合化疗药阿糖胞苷、喜树碱、紫杉醇，共同作用于人 白血病细胞系 KG1α 细胞，CCK8 检测其活性，观察 对 KG1α 细胞增殖的影响。

8 周龄、清洁级雄性 Wistar 大 鼠 36 只，体质量( 200 ± 20) g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，许可证号码: SCXK( 沪) 2017 － 0005。实验室温度 22 ～ 25 ℃、12 h 明暗循环，大鼠 自由饮水摄食。实验程序遵循美国《实验动物护理 和使用指南》 ( 《Guide for the Care and Use of Laboratory Animals》简称 Guide，NＲC 2011) 。KG1α 细 胞株: 购于北纳生物的 BNCC 细胞库。

益气养阴方: 黄芪 30 g、太子参 30 g、女贞子 21 g、旱莲草 18 g、麦冬 15 g，药材由杭 州华 东 医 药 提 供; 水 煎 2 次 合 并 滤 液，浓 缩 至 1. 14 g /mL，冷却后，分装，置于 4℃ 冰箱保存备用。 胎牛血清: Hyclone Company; IMDM 培养基、胰酶及 双抗: GIBCO Company; CCK8 试剂盒: 日本同仁化学 社; 喜 树 碱: Aladdin，C111281 － 20MG; 阿 糖 胞 苷: Aladdin，C111218 － 5G; 紫 杉 醇: Aladdin，P106868 － 10MG。

Sorvall ST16Ｒ 台式高速冷冻离心 机: Thermo 公司; Sorvall ST16Ｒ 台式低速离心机: Thermo 公司; 3111 型二氧化碳 培 养 箱: Thermo 公 司; 细胞培养瓶: Fisher Scientific 公司; 细胞培养皿: Fisher Scientific 公司; 微量加样器: ＲAININ 公司; 涡 旋振荡仪: Bio － Ｒad 公司; ECLIPSE Ti － S 型倒置显 微镜: Nikon 公 司; 九州网址BSC-1000A2生物安全柜: 1681130 － 4B 酶标仪: Bio － Ｒad 公司。

将大鼠随机分为空白对照 组和含药血清组，根据“动物与人体的每千克体质 量剂量折算系数表”计算大鼠灌胃剂量，成人与大 鼠的折算系数按 6. 25 计算，大鼠灌胃剂量 1 mL / 100 g，分 2 次给药( 每日上午 9 时和下午 15 时两次 灌胃) ，空白组给予等量生理盐水; 连续灌胃 5 d。 末 次 给 药 2 h 后。大 鼠 称 重，10% 水 合 氯 醛 ( 3. 8 mL / kg) 腹腔注射麻醉，心脏穿刺取血，灭活， － 20℃保存备用。取正常培养处于对数 生长期的 KG1α 细胞，800 r /min 离心 5 min，计数板 下计数，调整细胞密度为 5 × 104 个/mL，铺 96 孔板， 每孔均加入0. 1 mL细胞悬液，即 5 × 103 个/well。将 含药血清分为 5% 、10% 、15% 、20% 4 个浓度; 化疗 药物 作 用 浓 度: 阿 糖 胞 苷 160 mg /L，喜 树 碱 0. 1 mg /L，紫杉醇 50 mg /L。设置组别为: 空白对照 组、空白血清对照组、含药血清组( 5% 、10% 、15% 、 20% ) 、各化疗药物联合空白血清组、化疗药联合 15% 含药血清组。药物作用细胞 0、12、24、48、72 h。药物作用细胞 0、12、 24、48、72 h 后，每孔加入 10 μL CCK8 检测液的工 作液，设置空白对照孔，37 ℃ 避光反应 2 h，450 nm 处读取各孔 OD 值。实验结果按下式计算: 细胞存 活率 ( % ) = 实 验 组 OD 值/空 白 对 照 组 OD 值 × 100%所有数据采用平均数 ± 标准差 ( x ± s) 表示，应用 GraphPad Prism 6 统计软件，对所 得数据进行单因素方差分析制图，方差不齐者，将 数值取对数值后进行方差分析。P ＜ 0. 05 表示差异 有统计学意义。

见图 1。5% 、10% 、15% 、20% 含 药血清对 KG1α 细胞从 12 h 即出现不同程度的增 殖抑制，随着时间的推移，抑制效果有所减弱，以 15% 含药血清的抑制效果最为明显。不同浓度含药 血清联合化疗药对细胞均显示出不同程度的抑制 作用。

4 讨论

阿糖胞苷( cytarabine，Ara － C) 是一种核苷类似 物，是血液肿瘤尤其是急性髓细胞白血病( acute myelocytic leukemia，AML) 诱导和巩固治疗的常规药 物。在不同的方案中应用剂量不同，在 AML 的巩固治疗中，大剂量的阿糖胞苷可以达到明显的治疗效果。但是随着剂量越大，胞浆浓度越高，产生的 毒性就越大。

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