1 实验部分

 1. 1 仪器与试剂

 X-4 型数字显微熔点测定仪( 北京泰克仪器 有 限 公 司 ) ，温 度 未 校 正; JEOL-ECX500 型 500MHz 核 磁 共 振 谱 仪 ( 日本电子株式会社) ， TMS 为内标; LC-MS 1100 /MSD 液质联用仪( 美国 Agilent 公司) ; Elementar Vario-Ⅲ型元素分析仪 ( 德国 Elementar 公司) ; SPX-2508B-Z 生化培养箱 ( 上海九州网址实业有限公司医疗设备厂) ; SW-CJ-1G 超净工作台( 苏州净化设备有限公司) 。所用试 剂均为市售分析纯。 

1. 2 合成

1、2 和 3 的合成 3，4，5-三甲氧 基苯甲酸甲酯( 1) 、3，4，5-三甲氧基苯甲酰肼( 2) 和 5-( 3，4，5-三甲氧基苯基) -4H-1，2，4-三唑-3-硫 醇( 3) 的合成参照的方法。 1. 2. 2 2-( ( 5-( 3，4，5-三甲氧基苯基) -4H-1，2，4- 三唑-3-基) 硫) 乙 酸 乙 酯 ( 4 ) 的 合 成 称 取 13. 35g( 50mmol) 化合物 3 和 80mL 蒸馏水置于 250mL 三口烧瓶中，加入 3. 0g ( 75mmol) NaOH， 于室 温 下 搅 拌 至 溶 液 澄 清。随 后，逐 滴 加 入8. 25g( 55mmol) 溴乙酸乙酯。滴加完毕，于室温 下反应 5h，TLC 监测反应。待原料反应完全，停 止搅拌，抽滤，烘干，得白色粉末状固体，用乙醇重 结晶得到白色固体，产 率 85. 3%，熔 点 109 ～ 111℃ ; 1 H NMＲ ( 500MHz，DMSO-d6 ) δ: 14. 41( s， 1H，NH) ，7. 27( s，2H，Ph-H) ，4. 13( q，J = 7. 0Hz， 2H，CH2-) ，4. 03 ( s，2H，CH2-) ，3. 85 ( s，6H， CH3O-) ，3. 72( s，3H，CH3O-) ，1. 19( t，J = 6. 9Hz， 3H，CH3-) ; 13 C NMＲ ( 126MHz，DMSO-d6 ) δ: 169. 3，159. 2，155. 8，153. 8，139. 7，132. 0，129. 1， 122. 4，104. 0，61. 4，60. 6，56. 5，33. 8，14. 5。1. 2. 3 2-( ( 5-( 3，4，5-三甲氧基苯基) -4H-1，2，4- 三唑-3-基) 硫) 乙 酸 ( 5 ) 的 合 成 称 取 14. 2g ( 40mmol) 化合物 4 和 3. 36g( 60mmol) KOH 置于 250mL 三口烧瓶中，加入 150mL 蒸馏水，回流 3h。 冷却至室温，过滤除去不溶物，收集滤液，用 10% HCl 调节 pH 至 4 ～ 5，生成大量白色固体，抽滤， 烘干，得白色粗产物，用乙醇重结晶得到白色固 体，产 率 92. 5%，熔 点 151 ～ 152℃ ; 1 H NMＲ ( 500MHz，DMSO-d6 ) δ: 14. 38( s，1H，NH) ，12. 84 ( brs，1H，COOH) ，7. 27 ( s，2H，Ph-H) ，4. 00 ( s， 2H，CH2-) ，3. 85 ( s，6H，CH3O-) ，3. 72 ( s，3H，CH3O-) ; 13C NMＲ ( 126MHz，DMSO-d6 ) δ: 170. 5， 159. 5，155. 8，153. 7，139. 5，122. 5，103. 9，60. 6， 56. 5，34. 3。

1. 3 抗猕猴桃软腐病的抑菌活性测试

采用抑制菌丝生长速率法测定目标化 合物 6a ～ 6m 的体外抑菌活性。在药剂浓度为 50μg /mL 时，以猕猴桃软腐病中的葡萄座腔菌、 拟茎点霉菌和灰霉菌为测试菌种，在马铃薯葡萄 糖琼脂培养基( PDA) 上测试目标化合物 6a ～ 6m 抑菌活性，以商品药剂嘧霉胺为对照药剂。

2 结果与讨论

2. 1 目标化合物的合成及表征

中间体及目标化合物的合成路线如图式 1 所 示。以 3，4，5-三甲氧基苯甲酸、氨基硫脲为原料， 经缩合、环化等反应得到中间体 3; 中间体 3 与溴 乙酸乙酯在碱性条件下反应得到中间体 4，进一 步水解得到中间体 5; 中间体 5 与脂肪胺在 EDCI 和 HOBT 存在的条件下进行缩合得到目标化合物 6a ～ 6m。 在1 H NMＲ 谱图中，苯环上氢的化学位移在 8. 27 ～ 8. 28 处有一组单峰，与巯基相连的-CH2-的 化学位移在 3. 85 ～ 4. 25 处有一组单峰，苯环上 3 个 CH3O 的化学位移在 3. 85 和 3. 71 处出现 2 组 单峰。在 ESI-MS 谱图中，所有目标化合物均显示 出较强的［M+H］+ 或［M+Na］+ 峰) 。

2. 2 目标化合物抑菌活性测试

采用抑制菌丝生长速率法，以商品药剂嘧霉 胺为对照，在药剂浓度 50μg /mL 时测试了目标化 合物 6a ～ 6m 对猕猴桃软腐病中的葡萄座腔菌、 拟茎点霉菌和灰霉菌等三株菌的体外抑菌活性， 结果见表 1。化合物 6a ～ 6m 对葡萄座腔菌、拟茎 点霉菌和灰霉菌都表现出一定抑制活性。目标化 合物对葡萄座腔菌的抑制率在 28. 4% ～ 89. 3%之 间，其中，化合物 6k 和 6l 的抑制率为 85. 3%和 89. 6%，与对照药嘧霉胺的抑制活性相当; 化合物 6a ～ 6m 对拟茎点霉菌的抑制率在 31. 8% ～ 91. 3%，其中，化合物 6c、6d、6h 和 6k 的抑制率均 在 81. 7% ～ 87. 8%，化合物 6l 对拟茎点霉菌的抑 制率为 91. 3%，活性优于对照药嘧霉胺; 化合物 6a ～ 6m 对灰霉菌的抑制率在 45. 7% ～ 85. 3%，其 中，化合物 6d、6h、6k 和 6l 的抑制率均在 80. 8% ～ 85. 8%，与对照药嘧霉胺的活性相当。

3 结论

为寻找具有高活性的农药化合物，以 3，4，5- 三甲氧基苯甲酸为原料，经过酯化、肼解、环化、醚 化、水解、缩合等步骤合成了 13 个三唑硫基乙酰 胺类化合物。初步生物活性测试结果表明，大部 分目标化合物对猕猴桃软腐病中的葡萄座腔菌、 拟茎点霉菌和灰霉菌具有较好的抑制活性。其中 化合物 6k 和 6l 对葡萄座腔菌、拟茎点霉菌和灰 霉菌的抑制活性在 83. 4% ～ 91. 3%，化合物 6k 对 葡萄座腔菌和拟茎点霉菌的 EC50 值为 46. 6 和 30. 8 μg /mL，均优于对照药剂嘧霉胺。该系列化 合物均对猕猴桃软腐病中的葡萄座腔菌、拟茎点 霉菌和灰霉菌具有一定抑菌活性，在此基础上进 一步对其进行结构修饰和优化，有望获得较高生 物活性的农药小分子。

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