《中国药典》2015 年版记录并收载 5 个品种的
海马药材:三斑海马 Hippocampus trimaculatus
Leach、线纹海马 Hippocampus kelloggi Jorden et
Snyder、大海马 Hippocampus kuda Bleeker、刺海马
Hippocampus histrix Kaup 和小海马(海蛆)
Hippocampus japonicus Kaup 的干燥体,有散结消
肿、温肾壮阳等功效。三斑海马(俗名龙落子),
隶属我国国家二级保护动物,通常栖息在 1~100
公尺左右的具海藻床的礁石区中,也可生长在河海
交界处,喜食活饵,糠虾、毛虾、磷虾、萤虾等小
型浮游甲壳动物是其主要食物来源,其体色艳丽,
无毒,具有良好的观赏价值。
1 材料与仪器
1.1 材料
共收集海马药材样品 13 份,分别购自 浙江磐安以及安徽亳州药材市场,包括三斑海马样 品 12 份,宝珈海龙样品 1 份,经浙江中医药大学 第一临床医学院葛宇清副研究员鉴定为三斑海马 Hippocampus trimaculatus Leach 和宝珈海龙 Doryichthys boaja Bleeker。将所用样品做好标记, 于干燥封口袋中避光保存,样品保存于浙江中医药 大学药学院。同时在 GenBank 数据库中下载 20 条 COI、16 S 和 ATP6 序列(线纹海马 H. kelloggi Jorden et Snyder 3 条,大海马 H. kuda Bleeker 2 条,小海 马 H. mohnikei Bleeker 3 条,刺海马 H. histrix Kaup 2 条,太平洋海马 H. ingens Girard 2 条,直立海马 H. erectus Perry 2 条,虎尾海马 H. comes Cantor 2 条,棘海马 H. spinosissimus Weber 3 条,拟海龙 Syngnathoides biaculeatus Bloch 1 条)。
1.2 试剂
无水乙醇(上海凌峰化学试剂有限公司);海 洋动物组织基因组 DNA 提取试剂盒(天根生化 科技有限公司);琼脂糖粉(BIOWEST);50×TAE 缓冲液[生工生物工程(上海)股份有限公司]; DL2000 DNA Marker(TaRaKa 公司);6×Loading Buffer(TaRaKa 公司,);4S Green 染料(BBI Life Sciences);10×PCR buffer(TaRaKa 公司);dNTP Mix(TaRaKa 公司);rTaq 酶(TaRaKa 公司); COI、16 S rRNA 和 ATP 引物由上海桑尼生物科 技有限公司合成。
1.3 主要仪器设备
电子天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公 司];电热恒温水槽(上海森信实验仪器有限公司); 超微量分光光度计(美国 Thermo 公司);鼓风干燥箱(上海九州网址实业有限公司医疗设备厂);微波炉 (格兰仕微波生活电器有限公司);S1000TM Thermal Cycler(美国 Bio-rad 公司);凝胶电泳仪(美国 Bio-rad 公司);凝胶成像系统(美国 Bio-rad 公司); 离心机(杭州宝诚生物技术有限公司)。