辣椒花药的培养！
来源：未知
发布日期：2019-06-10 11:20【大 中 小】
由于夏季高温多雨，各种菌类大量滋生，虽然此时的辣椒花药最适宜诱导胚状体产生，但过高的污染率导致了花药培养效率变低。常规辣椒花药接种方法是在超净工作台上进行，用尖头镊子挑开灭菌后的花蕾，夹取花药接种至培养基中。辣椒花药较小，镊子夹取花药易夹伤或夹死花药，且该方法耗时长，所需人工成本高。另外，基因型特异性强也是限制花药培养技术在辣椒遗传改良中广泛应用的因素。本研究通过改进花蕾灭菌和花药接种方式，以及往培养基中添加抑菌剂，简化了花药培养技术流程，既能提高花药培养操作效率，又有效降低了花药染菌率；同时，采用该方法比较23个辣椒品种进行的花药培养效果，筛选出高再生频率的辣椒品种，以期为提高辣椒花药培养效率，加快辣椒花药培养技术的实用化奠定基础。
目前，大多辣椒花药培养文献报道均采用花蕾直接灭菌，由于花萼与花瓣间隙中的细菌难以彻底杀死，接种后花药染菌率仍然居高不下。本试验剥去花蕾3/4的萼片再进行灭菌，花药染菌率降低至5%以下，说明该方法更易杀死花蕾表面细菌和内生菌，具有可行性。常规的花药培养基需要高压灭菌，接种需要在超净工作台中用镊子夹取花药转至培养基表面。该方法需要特定的试验环境，且由于辣椒花药小，接种花药费时费工，难以进行规模化生产。其他植物进行组织培养时，研究者们提出了一种新的组织培养方法，即通过往培养基中添加抑菌剂，使植物组织培养脱离严格无菌的操作环境进行组织培养的一种方法，称之为开放式组织培养。
目前，已广泛应用于葡萄、香蕉、烟草等植物的组织培养中。在开放组织培养过程中，添加了抑菌剂的培养基不需要在高温高压下进行灭菌，接种外植体也不需要在超洁净的工作台上进行；因此，该方法从根本上简化了组织培养环节，降低了成本。本研究中，选择氨苄青霉素和两性霉素B作为抑菌剂，用于在开放条件下博辣红牛花药培养。结果显示，25mg/L的氨苄青霉素和25mg/L的两性霉素B适宜用于辣椒花药培养，花药染菌率1.42%，死亡率为3.89%，愈伤组织诱导率为13.51%，胚状体诱导率为3.87%，由此说明，25mg/L的氨苄青霉素和25mg/L的两性霉素B适宜于用做开放式培养抑菌剂。
此外，还改进了花药接种方式，试验结果表明：徒手挤压花药可降低对花药的伤害，花药接种速度与传统方法相比可提高2.18倍，说明徒手挤压花药省时、省工，可有效降低人工成本。作物花药胚状体诱导率与基因型密切相关。辣椒花药培养受基因型、生长环境、植株状态、培养基成分等多种因素的影响，基因型是影响辣椒花药培养的重要因素之一。本研究也表明不同基因型间花药胚状体诱导率存在差异，且从23个基因型品种中筛选到了3个高诱导频率的辣椒品种，其胚状体诱导率大于5%，可满足种质创新条件。
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