回顾 2017 年 4 月～ 2018 年 6 月在我院产 科门诊选择无创 DNA 进行产前筛查的孕妇共计 6903 例， 孕妇年龄为 17 ～ 44 岁，孕周为 12w 以上，近期未接受过 移植手术、异体输血、干细胞治疗，BMI 指≤ 28 的产前孕 妇进行分类指征统计，按照高龄妊娠（≥ 35 岁）、血清学 筛查高风险 / 临界风险、NT 增厚、B 超软指标异常 / 结构 异常、双胎 /IVF-ET 妊娠、错过其它筛查时机（≥ 22w）、 其它检测（流产≥ 2 次和有不良妊娠或生育史）及自愿要 求检测进行分指征统计，若同一位孕妇存在两种或多种指 征，按上述顺序只填写最靠前的一次指标，同时统计二胎 例数。NIPT 产前筛查提示阳性结果的孕妇共 77 例，其中 13 例拒绝产前诊断直接引产，2 例流产，剩余 62 例均做同 意羊膜腔穿刺术进行产前诊断，对羊水进行培养及核型分 析，对微缺微重同时进行 CMA 检测，最终确诊为阳性例 数为 34 例，其中目标检测疾病 T21/T18/T13 筛查阳性 31 例， 诊断阳性 20 例。并按时进行随访，记录妊娠结局。

文库构建试剂、测序芯片等均购 置于北京博奥生物公司。主要使用仪器 BioelectronSeq 4000高通量测序仪购置于北京博奥生物公司、实时定量 PCR 采 用 SYBR Green Realtime PCR Master Mix 在 ABI 7500 Realtime PCR Systems（Applied Biosystems）、九州网址培养箱、 北昂核型分析软件。

DNA 提取及文库构建、文库定量、按照公 式稀释倍数 = 混合文库浓度（nM）*1000/ 上机浓度（pM） 进行混合文库 pooling 后上机测序。

测序仪进行高通量测序，基于 每个基因芯片中的反应孔会读出一段短序列，成为 read， 根据染色体 N 上的 unique read 的总数 / 全部常染色体上 unique reads 总数，Z-score= 样本 %chrN- 参考样本的 %chrN 的平均值 / 参考样的 %chrN 的标准差，按照质控标准和数 据分析软件进行测序分析。

筛查阳性孕妇均在超声引导下抽取 羊水 20ml，分别置于 2 个培养瓶中，每瓶 10ml。

对羊水细胞培养、收获并制片、G 显带后进行核型分析，必要时加做 C 显带。

对需要做 CMA（SNParray）检测的孕妇，我院进行转诊至上级医院。

采用 SPSS 19.0 软件进行统计学分析。 定性资料用率（%）表示，组间比较采用 χ2 检验。P ＜ 0.05 为差异有统计学意义。

我院共检测无创产前 筛查检测 6903 例，无创产前检测中占比最多的 主要为自愿要求检测组例数为 4651 例，占无创总检测比例 的 67.38%，其次为高龄妊娠（≥ 35 岁）检测例数 1366 例， 占无创总检测比例的 19.78% ；血清学筛查高风险 / 临界风 险检测例数 495 例，占无创总检测比例的 7.17% ；检测占 比最少的两项指征分别是 NT 增厚检测例数 11 例，B 超软 指标异常 / 结构异常检测例 28 例，NT 增厚和 B 超异常共 计占比仅为无创总人数的 0.56% ；双胎和 IVF-ET 妊娠检 测例数 129 例，错过其它筛查时机检测例数 181 例，它们分别占无创检测总数的 1.87% 和 2.60% ；其它检测例数（自 然流产 2 次以上及不良妊娠史）42 例，占总检测例数的 0.61%。各类指征中二孩（含以上）合计检测例数为 3521 例占总检测例数的 51%，其中高龄二孩 921 例占总检测数 为 67.4%，自愿检测 2243 例占比 48.2%，国家开放二孩政 策以来有效推动生育率的增加。总体阳性检出率以高龄妊娠 （≥ 35 岁）和自愿检测指征例数为主，最高检出率来自 T21 错过筛查时间指征，其余不同指征检出率均较低，维持在 0～1.1% 之间的检出率，筛查阳性分布从 0 到 22 例不等， 因此确诊例数较少。针对 T21 三体阳性，检出率 最高的为错过其它筛查时间检出率为 2.21%，其次为高龄妊娠 0.73% 和双胎 /IVF-ET 妊娠 0.78% 的检出率，血清学 筛查高 / 临界风险为 0.40%，最低检出率为自愿组 0.22% ； 针对 T18 三体阳性，检出率最高的为错过其它筛查时间检 出率为 1.10%，其次为 T18 高龄组指征，检出率为 0.37%， 最低为 T18 自愿组 0.06% ；针对 T13 三体，T13 自愿组和 高龄出检出率相近，分别为检出率为 0.09% 和 0.07% ；针 对性染色体异常 SCA（Sex chromosome abnormality）阳性， 错过其它筛查时间筛查检出率为 0.55%，SCA 自愿组和高 龄组检出率相近，分别为检出率为 0.47% 和 0.44% ；针对 常染色体异常检出率，高龄组检出率为 0.22%，略高于 0.19% 自愿组检出率，确诊为常染色体异常的 1 例来源于母亲遗 传，正常分娩并跟踪随访，无异常表现。

引起假阳性的原因主要有以下三方面因素 ：标本的 来源 ：无创 DNA 通过采集孕妇外周血，从中分离胎儿的游 离 DNA，这部分 DNA 来源于胎盘的脱落细胞，若孕妇 胎盘存在拷贝数变异或者异常时，往往会在无创检测中提 示高风险，而这类高风险其实与胎儿本身是否存在染色体 异常关系较小，此类假阳性可采用产妇分娩后对胎盘不同 部位进行取材后再进行高通量检测，寄希望能找到胎盘与 NIPT 筛查阳性的关系研究 ；母体基因组本身存在拷贝数变 异 ：如存在恶性肿瘤时，导致母体体内存在大量的肿瘤细 胞，此类细胞 DNA 会增加，直接导致无创检测指标提示 存在异常，此类也会导致筛查假阳性情 ；测序技术本身的 局限性 ：高通量测序技术在短时间内可对大量数据进行检 测分析，但是容易出现错误概率，目前测序平台的错误率 有 Q20/Q30/Q40 等级别，如 Q20 平台，即提示存在 1% 的 错误率，这会导致数据结果异常，由于是高通量测序而非 Sanger 测序，因此会出现覆盖率和测序深度等问题，若降 低芯片上样量，在一定程度上可以提高测序准确性，但是 成本较高。因此特别强调 NIPT 高风险不能作为引产指征， 必须进行产前诊断才能判定，在临床咨询工作中应提高孕 妇对 NIPT 这项新技术的风险认知，且强调产前诊断费 用报销问题，减轻其经济压力，孕妇在根据 NIPT 提示高 风险时，是否接受产前诊断除与遗传咨询相关外，还与孕 妇本身的身心状态、文化背景和教育认知水平，经济状况 等因素有关，应尽最大程度避免孕妇因上述问题而导致选 择终止妊娠。 



 

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