结核病是一种由结核分枝杆菌（ＭＴＢ）感染引起 的传染病，严重危害着人类的生命健康。根据世界卫 生组织（ＷＨＯ）２０１７年全球结核病报告显示，２０１６年 全球结核病发病的人数为１０４０万，中国是全球３０个 结核病高负担国家之一。此外，在我国甲、乙类传 染病病死率中，肺结核排名第２位，其实验室诊断率 不足４０％。由于结核病的诊断较为复杂，既往的细 菌病原体检测、结核菌素皮肤试验（ＴＳＴ）、抗结核抗 体检测及影像学检查等诊断方法远远不能满足临床 需求。经过不断地研究，以 Ｔ 淋巴细胞免疫为基础 的体外γ－干扰素释放试验（ＩＧＲＡｓ）近年来在临床得 到广泛应用。ＩＧＲＡｓ检测的基本原理是 ＭＴＢ 特异 性抗原－早期分泌抗原６（ＥＳＡＴ－６）和培养滤液蛋白１０ （ＣＦＰ－１０）在体外刺激全血中的 Ｔ 淋巴细胞产生 γ干 扰 素 （ＩＦＮ－γ），通 过 酶 联 免 疫 吸 附 测 定 实 验 法 （ＥＬＩＳＡ）测 定 ＩＦＮ－γ 水 平 来 判 断 受 检 者 是 否 感 染 ＭＴＢ。虽然ＩＧＲＡｓ已成为国内外结核诊疗指南推荐 的重要实验室检测方法，是临床诊断结核病的重 要辅助手段，但在检测过程中，除了有阴性结果、阳性 结果外，还会产生一定比例的不确定结果（ＩＴＲｓ）。

回顾２０１４年７月至２０１８年７月在 本院１７８１例可疑结核感染患者或需排除结核感染患 者的ＩＧＲＡｓ检测结果，年龄为（４８．２３±１９．８４）岁，其 中男１１３９例，女６４２例。按不同年龄分为３组，＜１８ 岁组１６３例，１８～６５岁组１１００例，≥６５岁组５１８例。

ＩＧＲＡｓ试剂盒（北京万泰生物药 业股 份 有 限 公 司），恒温培养箱 （上海九州网址公司）， ＭｕｔｉｓｋａｎＦＣ酶联免疫检测仪（赛默飞世尔仪器有限公司）。

严格按照试剂盒说明书操作。 采集４ｍＬ肝素锂抗凝静脉全血，２ｈ之内送至实验 室。按 每 管 １ ｍＬ 全 血 分 装 至 本 底 对 照 培 养 管 （Ｎ 管）、测试培养管（Ｔ 管）、阳性对照培养管（Ｐ管），轻 柔颠倒混匀５次后，将培养管直立于３７ ℃恒温箱中， 温育２２～２４ｈ。将培养后的培养管以３０００ｒ／ｍｉｎ，离 心 １０ ｍｉｎ，通 过 ＥＬＩＳＡ 检 测 上 清 液 中 的 γ－干 扰 素 （ＩＦＮ－γ）水平，酶标仪在波长４５０ｎｍ 处测定其吸光度Ａ，根据试剂盒中校准品制作标准曲线，计算ＩＦＮ－γ 水平。

由６个标准液的吸光度 Ａ 值与相应浓度计算得出的相关系数（ｒ）≥０．９９；４００ ｐｇ／ｍＬ的标准液的平均吸光度Ａ 值＜１．０。 １．３．３ 判断标准 所得不确定结果均需重新采集样 本复查，以排除实验因素引起不确定结果，复查后仍 为不确定，则判定为不确定结果。

回顾２０１４年７月至２０１８年７月 例患者的ＩＧＲＡｓ检测结果，用 Ｅｘｃｅｌ２００７软件建立 数据库，用ＳＰＳＳ２２．０软件进行统计分析。计数资料 用百分率表示，组间比较用χ ２ 检验，采用二元Ｌｏｇｉｓｔｉｃ 回归进行单因素与不确定结果的分析，Ｐ＜０．０５表示 差异有统计学意义。

１７８１ 例ＩＧＲＡｓ检测样 本，阳性５６９例（３１．９５％），阴性１１５１例（６４．６３％）， 不确定结果６１例（３．４３％）。１７８１ 例ＩＧＲＡｓ检测样本中，男性１１３９例，女性６４２例，男 性阳性率为３３．４５％，女性阳性率为２９．２８％，差异无统计学意义（χ ２＝３．２０８，Ｐ＝０．０７５）；男、女患者ＩＴＲｓ 分别 为 ３．３４％，３．５８％，差 异 无 统 计 学 意 义 （χ ２ ＝ ０．０７３，Ｐ＝０．７８４）。１７８１ 例ＩＧＲＡｓ检测样本中，＜１８岁组的患者ＩＧＲＡｓ阳性 率明显低于１８～６５岁组和≥６５岁组，差异有统计学 意义（χ ２ ＝２８．４４８，Ｐ＝０．０００）；与 １８～６５ 岁 组 比 较，＜１８岁组和≥６５岁组ＩＴＲｓ发生率较高，差异均 有统计 学 意 义 （χ ２ 值 分 别 为 １０．５８４、９．０１５；Ｐ ＝ ０．００１、０．００３）。＜１８岁组和≥６５岁组ＩＴＲｓ发生率 比较，差异无统计学意义（χ ２ ＝０．７２２，Ｐ＝０．３９６）。

对６１例可疑结核感染患者ＩＧＲＡｓ的ＩＴＲｓ标本进行 回访，剔除４例资料不全患者，经二元ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分 析，自身免疫性疾病（ＯＲ 为２．８４；９５％ＣＩ 为１．５０～ ５．３９；Ｐ＝０．００１）、ＨＩＶ 感染患者（ＯＲ 为３．０４；９５％ ＣＩ为 １．２６～７．３５；Ｐ＝０．０１３）的ＩＴＲｓ与确定结果 （阴性／阳性）差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。

目前，大量研究评估了ＩＧＲＡｓ在疑似结核病患者诊断中的临床应用价值，而较少研究ＩＧＲＡｓ检测中 出现的不确定结果。ＤＩＥＬ等研究显示，ＩＧＲＡｓ的不确定结果发生率在３％～２１％，不确定的结果可能限 制ＩＧＲＡｓ使用的有效性，影响结核病的诊断和治疗。 因此，除了关注ＩＧＲＡｓ检测的阴性或阳性结果之外， 还应重视ＩＧＲＡｓ不确定结果发生的比例和原因，为 临床疾病的诊断和治疗提供帮助。综上所述，通过回顾分析本院检测的可疑结核感 染患者或需排除结核感染患者ＩＧＲＡｓ的不确定结果 发生的比率及原因，发现不确定结果发生不仅与年龄 因素关系密切，还与患者的免疫功能状态或免疫抑制 剂的使用密切相关。



 

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