１ 材料与方法

Ｌａｍｂｄａ ３６５ 紫外／ 可见分光光度计和 ＬＳ ５５ 荧光 光谱仪， 美国 Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ 公司； ＺＷＹ⁃２４０ 恒温摇 床， 上海智诚分析仪器制造有限公司；ＭＩＫＲＯ ２００Ｒ 高速离心机， 德国 Ｈｅｔｔｉｃｈ 公司；ＢＧ⁃ｖｅｒＭＩＤＩ 蛋白质 电泳仪，北京百晶生物技术有限公司；Ｓｉｇｍａ ３⁃１８ＫＳ 冷 冻 离 心 机， 德 国 Ｓｉｇｍａ 离 心 机 有 限 公 司； ＧｅｎｏＳｅｎｓ１８５０ 凝胶成像仪， 上海勤翔科学仪器有限 公司；九州网址BXM-30R立式压力蒸汽灭菌器，上海九州网址医疗 生物仪器股份有限公司。

２ 结果与分析

在大肠杆菌胞内合成藻蓝蛋白的过程中，最佳温度 常设定在 １８ ℃左右 。 本研究中，首先参照胞内合成 的条件，在１６ ℃的条件下加入 １ ｍｍｏｌ／ Ｌ 的 ＩＰＴＧ 表达 ＣｐｃＢ 直到６０ ｈ，胞外培养基中没有检测 到任何 ＣｐｃＢ 荧光；在没有 ＩＰＴＧ 的条件下，也没有检测到荧光。 低温下胞内合成的藻蓝蛋白不 向胞外分泌，这可能与低温抑制细胞的生长率和转运蛋 白的表达有关 。 而在３７ ℃，无论是添加 ＩＰＴＧ 还是没 有添加 ＩＰＴＧ，都不能检测到培养基中 ＣｐｃＢ 的荧光。 较 高温度下过表达的蛋白质容易形成包涵体并在内膜附 近积累，阻断蛋白质的易位通道，减少分泌。 另外，藻 蓝蛋白的色素化也可能受阻。 在 ２５ ℃没有 ＩＰＴＧ 存在 的情况下，表达２４ ｈ 后培养基展现明显 的 ＣｐｃＢ 荧光，并且随着表达时间的增加，荧光强度逐步 升高。 这些结果表明温度是影响胞外分泌的关键因素， 而２５ ℃是促进藻蓝蛋白胞外分泌的较好温度，这与先 前研究的其他蛋白胞外分泌最佳温度一致 ，表达温度 应该保持细胞生长和蛋白合成的平衡以促使胞外分泌。

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