甘露饮中多种成分相辅相成、协同作用是其药理作用的重要基础,而各种潜在活性成分的含量与临床治疗效果密切相关。绿原酸是茵陈的有效成分之一,具有清除体内自由基、抗氧化、抗菌、抗病毒和保肝利胆等作用。在国内外研究中分别关于绿原酸、麦角甾苷、柚皮苷、黄芩苷、甘草酸和熊果酸的含量提取及测定方法有相关报道,而甘露饮中多种代表性活性成分的提取及同时定量,国内外尚未见文献报道。因此,本实验上海博讯采用了正交试验法,以6种有效成分绿原酸、麦角甾苷、柚皮苷、黄芩苷、甘草酸和熊果酸的含量为指标,对甘露饮的提取工艺进行研究,优选出最佳提取工艺,同时建立了HPLC法测定6种有效成分的含量,为完善甘露饮质量评价标准和临床用药提供依据。
1260 高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司);烘箱(上海博讯医疗生物仪器股份有限公司);XW-80A 型旋涡混合器(上海青浦泸西仪器厂);旋转蒸发仪(德国 IKA);CP225D 型电子天平(德国赛多利斯公司);粉碎机(吉首市中诚制药机械厂)。
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方差分析结果表明提取时间对熊果酸、甘草酸、柚皮苷、绿原酸的提取含量影响显著;黄芩苷的提取含量受料液比、提取时间、提取次数的影响当;提取时间、提取次数对麦角甾苷的提取含量影响不显著。料液比、提取时间对甘草酸的提取含量有显著影响:料液比1:8、提取时间为1h得到甘草酸含量最多,即序号4为最优;提取次数对绿原酸含量有显著影响:提取次数为1次,绿原酸含量最多,即第3因素下1水平为最优方法。液料比、提取时间、提取次数对熊果酸、黄芩苷、柚皮苷、麦角甾苷提取含量影响并不显著。综合以上实验结果,最佳提取工艺条件是:甘露饮提取溶剂为60%乙醇,料液比1:4、提取时间为1h、提取次数为1次。
试验考察了甲醇、乙腈、缓冲盐种类和浓度对样品分离的影响,最后确认乙腈和0.1% 磷酸溶液进行梯度洗脱后,各色谱峰分离度好,保留时间适中,基线稳定,绿原酸、黄芩苷、甘草酸和熊果酸峰型和分离度均较好,而麦角甾苷与柚皮苷由于自身化学性质和方剂中含量差异的影响,能实现基线分离。经过方法学考察试验,本文上海博讯建立的含量检测方法准确、可靠,重复性好,可用于同时测定甘露饮中多种物质的含量,为甘露饮质量控制及综合评价提供了借鉴。