材料

VD.650桌上式洁净工作台购自苏州净化设备有限公 司；YXQ-LS-18SII手提式压力蒸汽灭菌器购自上海博 迅实业有限公司；THz-103B恒温培养摇床购自上海一恒 科学仪器有限公司；UV-2100紫外可见分光光度计购自 上海尤尼柯仪器有限公司；AA-7000原子吸收分光光度 计购自日本岛津公司；varioELcube 元素分析仪购自德国 Elementar公司；旋转蒸发仪购自德国IKA公司；FD-1c-50 冷冻干燥机购自北京博医康实验仪器有限公司；CR22冷 冻离心机购自日本Hitachi公司。

方法

在 20mL 的 ddH2O 水中加入 10g 药渣，放置于摇床中混合5min。取出混匀的液体后，使用 移液枪分别将混合液稀释为1×10-1、1×10-6，从每个梯 度的混合液分别中吸取 200uL 液体至 Ashby 无磷固体培 养基中，用灭过菌的涂布棒将培养基上的混合液涂抹均 匀，晾干后于 28℃培养箱中倒置培养 2 天。从生长好的 Ashby无磷固体培养基中挑选长势良好的单菌落，通过平 板划线法对选取的单菌落进行分离纯化，将最终得到的 单菌株移至斜面，放入4℃冰箱中保存备用。从培养基上选取长势良好的单 菌落移至100mL无磷液体培养基中，放置于28℃摇床中 以180rpm生长3天得到种子液。将生长好的菌液于离心 机中6000rpm离心10min，将得到的菌液沉淀取一部分干 燥至粉末后称重，并以中药菌体.1 的方式对其进行命 名。将剩余菌液沉淀分为 3 份，分别移至 250mL532 的 Ashby无磷液体培养基中，放入28℃摇床中180rpm生长7 天。取出培养好的菌液，放入离心机中离心处理，上清液 旋蒸后冷冻干燥获得粉末，对获得的粉末称重后以中药 发酵液-1的方式命名；离心得到的沉淀放入50℃烘箱中干 燥处理后进行称重，得到的粉末以中药菌体-2的方式命名。

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