膜性肾病(Membranous nephropathy,MN)是临床 上较为常见的一种肾小球疾病,是成人肾病综合症 常见病理类型之一。其病理特征主要为肾小球毛细 血管基底膜弥漫性增厚,且伴随着上皮细胞下免疫 复合物沉积。该病迁延难愈,有超过 40%患者进一 步发展为慢性肾衰竭。目前针对 MN 治疗尚无特效 药物,临床常使用激素、细胞毒性药物、免疫抑制 剂等药物进行治疗,但这些药物总体疗效不佳,且 往往伴随着一系列不良反应。因此,亟需探寻安 全有效的治疗 MN 的药物。近年研究发现,中医药在 治疗 MN 方面有着独特优势,可与西药进行联合规范 化治疗,有助于控制 MN 的病情进展,降低药物不良 反应的发生。
1 材料与方法
1.1 动物
SD 大鼠 45 只,雄性,SPF 级,体质量(200±20)g,广州中医药大学实验动物中心提供,动 物许可证号:SCXK(粤)2013-0034。
1.2 药物及试剂
白芍总苷,宁波立华制药有限公 司,批号:20140712;醋酸泼尼松片,广东华南药 业集团有限公司,批号:140502;白蛋白(ALB)测定 试剂盒(批号:20160518)、总蛋白(TP)测定试剂盒 (批号:20160523)、总胆固醇(TC)测定试剂盒(批 号:20160412)、甘油三酯(TG)测定试剂盒(批号: 20160513)、 丙 二 醛(MDA)测 定 试 剂 盒(批 号 : 20160416)、总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(批 号:20160507),均为南京建成生物工程研究所产 品;Beclin1 抗体(批号:3738s)、PI3K 抗体(批号: 4257S)、p-Akt 抗体(批号:4060P)、mTOR 抗体(批 号:2983S)、Desmin 抗体(批号:5332D)、β-actin 抗体(批号:D0615),均为美国 CST 公司产品;LC3 抗 体,英国 Abcam 公司,批号:ab192890;Synaptopodin 抗体,美国 Santa Cruz 公司,批号:sc-515842。
1.3 仪器
THM51119300 全波长酶标分析仪,美国 Thermo Fisher Scientific 公司;T15RT 台式高速冷冻 离心机,上海天美生化仪器设备工程有限公司; HH.S11-6 电热恒温水浴锅,上海博讯提供;天能凝 胶成像系统,上海天能化学发光工作站;TE2000-S 荧光倒置显微镜,日本 NIKON 公司。
1.4 分组、模型复制及给药方法
大鼠适应性喂养 1 周后,随机分出 8 只作为正常对照组,其余大鼠按 以下方法进行模型复制:取制备好的 C-BSA(参照 Border 法制备)1 mg 加入 0.5 mL 弗氏不完全佐剂制备成乳剂,于大鼠皮下进行多点注射预免疫。1 周 后,大鼠隔天尾静脉注射 2.5 mg C-BSA,连续 3 周。模型复制结束后,用考马斯亮蓝法测定各大鼠 24 h 尿蛋白含量,与正常对照组比较,剔除模型复 制组中尿蛋白为阴性的大鼠,然后随机分为模型 组,TGP 高、低剂量(200、100 mg·kg-1)组,醋酸泼 尼松(5 mg·kg-1)组,每组 8 只。采取直接灌胃法给 药,每日 1 次,连续 4 周。空白对照组和模型组给 予等体积生理盐水灌胃。
2 结果
见表 1。与正常对照组比较,模型 组大鼠血清中 TP、ALB 含量显著降低(P < 0.01), TC、TG 含量显著升高(P < 0.01);与模型组比较, TGP 高、低剂量组和醋酸泼尼松组大鼠血清中 TP、 ALB 含量显著升高(P < 0.05,P < 0.01),TC、TG 含 量显著降低(P < 0.01)。
与正常对照组比较,模型组大鼠血 清中 MDA 含量显著升高(P < 0.01),SOD 含量显著 降低(P < 0.01);与模型组比较,TGP 高、低剂量组 和醋酸泼尼松组大鼠血清中 MDA 含量显著降低(P < 0.01),SOD 含量显著升高(P < 0.05,P < 0.01)。
3 讨论
TGP 是从传统中药毛茛科植物白芍中提取的一组 糖苷类物质,是白芍的主要有效成分 。近年来已被 广泛应用于治疗各种免疫性疾病 。研究表明,该药 单用或者联合使用治疗各种类型肾脏疾病,如糖尿 病肾病、狼疮性肾炎及肾病综合症等均显示出良好 治疗效果,能够有效地缓解肾病临床症状及调节异 常血液生化指标。与传统治疗药物比较还具有 不良反应小,无肝功能损伤的优势。因此,深入探 讨 TGP 治疗慢性肾病的作用及相关作用机制具有重 要的临床价值。