华中枸骨 Ilex centrochinensis S． Y． Hu 又称针齿冬青， 是冬青科冬青属植物，主要生长在海拔 300 ～ 1 000 m 的山 坡和灌木丛中，广泛分布于湖北恩施，其性味甘凉，具有 清热解毒功效，药用部位主要为根和叶，其中后者在民间 常被用来治疗烫火伤，在其他地区也是制作苦丁茶的原料。目前发现，华中枸骨叶中主要含有萜类、有机酸、 黄酮类等成分，其中黄酮类具有广泛生物活性，如抗氧 化、抗癌、抗菌等，但目前对该类成分的研究较少， 并且尚未涉及其提取工艺和抑菌作用

1 材料

1. 1 试药

华中枸骨叶采自湖北省恩施市建始县，经湖北 民族大学医学部胡泽华博士鉴定为冬青科冬青属植物华中 枸骨 Ilex centrochinensis S． Y． Hu 的叶，烘干后粉粹，过 60 目筛。芦丁对照品 ( 上海金穗生物科技有限公司) 。MH 琼 脂、MH 肉汤 ( 杭州微生物试剂有限公司) ; 金黄色葡萄球 菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、宋内志贺菌为湖北民族 大学医学部微生物实验室保存菌种。亚硝酸钠、氢氧化钠、 硝酸铝、无水乙醇均为国产分析纯。

1. 2 仪器

SSW 微电脑电热恒温水槽 ( 上海九州网址实业有 限公 司 医 疗 设 备 厂) ; NU-425-400S 生 物 安 全 柜 ( 美 国 NuAire 公司) ; DFY-1000C 高速万能粉粹机 ( 无锡沃信仪器有限公司) ; CL-32 L 高压蒸汽灭菌器 ( 日本 ALP 公司) ; THC-10B 数控超声波提取机 ( 济宁天华超声电子仪器有限 公司) ; ELJ-2800Ｒ 紫外可见分光光度计 ( 上海昂拉仪器有限公司) 。

2 方法和结果

称取药材粉末适量，25 ℃ 下按 液料比 10 ∶ 1 加入 60%乙醇，置于超声波提取机 ( 功率 480 W) 中提取 10 min，提取液过滤，滤渣在相同条件下 再提 取 1 次，合 并 2 次 滤 液，离 心、浓 缩，加 水 定 容， 即得。配制 0. 1 mg /mL 芦丁对照品溶 液，分别取 0、1、2、3、4、5 mL 于 10 mL 量 瓶 中，加 30%乙醇至 5 mL，加入 5%亚硝酸钠 0. 3 mL，摇匀，放置 6 min，加入 10%硝酸铝 0. 3 mL，摇匀，放置 6 min，加入 1 moL/L 氢氧化钠 4 mL，加水定容至 10 mL，摇匀，放置 15 min，于 510 nm 波长处测定吸光度。以溶液质量浓度为 横坐标 ( X) ，吸光度为纵坐标 ( A) 进行回归，得到方程 为 A = 10. 17X + 0. 015 3 ( Ｒ = 0. 999 7 ) ， 在 0. 010 ～ 0. 050 mg /mL范围内线性关系良好。取对照品溶液，按 “2. 1. 2”项下方 法测定 6 次，测得吸光度 ＲSD 为 0. 19%，表明仪器精密度 良好。精密量取总黄酮含有量已知的供 试品溶液 6 份，加入对照品溶液，测得芦丁平均加样回收率为 99. 78%，ＲSD 为 1. 35%。固 定 提 取 时 间 10 min，液 料 比 10 ∶ 1，加入 40%、50%、60%、70%、80%乙醇，测定总 黄酮含有 量，结 果 见 图 1。由 图 可 知，乙醇体积分数在 40% ～ 60%范围内总黄酮含有量逐渐提高，60%时最高，但 进一步增加后反而下降，这是因为乙醇体积分数升高，其 极性也会随之改变，根据相似相溶原理，从药材中溶出的 总黄酮量也会有所变化，同时醇溶性杂质溶出量也会增加， 会与总黄酮竞争性地与乙醇-水分子结合，导致后者溶解度 降低，含有量下降。因 此，确定最佳乙醇体积分数 为 60%。

3 讨论

在优化工艺 ( 提取温度 25 ℃，超声功率 480 W，乙醇 体积分数 55%，液料比 25 ∶ 1，提取时间 30 min，提取次 数 2 次) 下，华中枸骨叶总黄酮提取物对金黄色葡萄球菌、 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、宋内志贺菌有一定抑制作用， 并呈浓度依赖性。近年来随着抗生素大量不合理使用，耐 药菌株越来越多，但细菌对有抗菌作用中草药产生耐药性 的速度慢于对抗生素的，而且容易消失，故本实验也可 为临床上防止菌株产生耐药性提供新思路。



 

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