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超声细胞破碎材料与方法

返回列表 来源:未知 发布日期:2024-08-12 08:48【

1.1材料与试剂黑桑葚干:新疆和田市丝路果果特产;石油醚(沸程30~60℃)、三氯甲烷、正丁醇、95%乙醇:分析纯,天津市德恩化学试剂有限公司。

 

1.2仪器与设备超声波细胞破碎仪:TL-ST400型,江苏天翎仪器有限公司;高速多功能粉碎机:RHP-2000A型,天津荣浩机电设备有限公司;数显恒温水浴锅:HH-4型,上海树立仪器仪表有限公司;高速离心机:TCL-16型,常州金坛良友仪器有限公司;粗脂肪测定仪:SZF-06A型,上海洪纪仪器设备有限公司;电热鼓风干燥箱:DGH-9140A型,上海一恒科学仪器有限公司。

 

1.3方法

1.3.1桑葚样品处理将桑葚干样品烘干至恒重,粉碎,过70目筛后密封保存备用。1.3.2脱脂参照GB5009.6—2016并修改。称取处理好的桑葚样品4.000g,水浴温度70℃回流抽提4h,控制每分钟80滴左右。脱脂后滤掉废液得桑葚样品。1.3.3细胞破碎仪辅助热水浸提桑葚多糖称取脱脂后的桑葚样品1.000g,按料液比1:30(g/mL)加入蒸馏水,65℃恒温水浴锅中用细胞破碎仪辅助浸提,将超声波细胞破碎仪变幅杆末端插入液面8mm并使其位于容器中心位置。变幅杆转换开关打到Φ6,设置超声时间1.2s,间歇时间1.5s,用纱布过滤混合物,3500r/min离心10min,收集上清液,65℃水浴浓缩至液体体积为10mL。

1.3.4桑葚多糖的脱蛋白根据文献稍作修改:将浓缩后的桑葚样品置于分液漏斗中,按体积比1:2加入Sevag试剂(V三氯甲烷:V正丁醇=4:1),充分摇匀,静置,待分液漏斗中液体分层完毕后,除去底层的有机溶剂及中间层的蛋白质,收集上层液,3500r/min离心10min,除去残留蛋白质,收集上清液备用。1.3.5桑葚多糖的制备向脱蛋白后的上清液中加入4倍体积95%乙醇,混匀静置片刻后沉淀析出,3500r/min离心10min,弃上清,将沉淀放置于蒸发皿中,65℃干燥1.5h,即为桑葚多糖提取物。


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